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Concetti e conoscenze di base delle principali tecniche molecolari in uso in diagnostica nei laboratori di Patologia clinica

M. Cioffi “Manuale di diagnostica di laboratorio” Minerva medica
T. Strachan A.P. Read. “Genetica umana molecolare” UTET

Il corso ha l’obiettivo di consentire allo studente di conoscere le principali tecniche molecolari utilizzate per la determinazione di mutazioni e polimorfismi noti coinvolti in varie patologie, per screening mutazionali, nella diagnosi di microrganismi e nella diagnosi della resistenza ai farmaci

- Fondamenti di fisica e chimica generale
- Fondamenti di biologia e biochimica
- Fondamenti di fisiologia
- Fondamenti di microbiologia

Il Corso sarà svolto con lezioni frontali

La verifica dell’apprendimento sarà effettuata mediante un colloquio orale, volto ad accertare le conoscenze degli argomenti affrontati durante il corso

1. Estrazione, precipitazione, separazione analitica e dosaggio degli acidi nucleici

2. PCR (Polymerase Chain Reaction). Amplificazione nested. Multiplex PCR

3. RT-PCR (Reverse Transcription-PCR)

4. Real-time PCR

5. Strategie per la determinazione di mutazioni e polimorfismi:
PCR-CTPP (PCR-Confronting Two Pair Primers)
PCR-ARMS (PCR-Amplification Refractory Mutation System)
PCR-reverse dot-blot
Enzimi di restrizione e loro applicazione nella diagnosi di mutazioni, PCR-RFLP (PCR- restriction fragment length polymorphism)

6. La PCR nella diagnostica microbiologica

7. Determinazione della sequenza di un acido nucleico mediante Sequenziamento automatico diretto (Metodo di Sanger)

8. Next Generation Sequencing (NGS)

9. Multiplex Ligation-Dependent Probe Amplification (MLPA) per analisi di riarrangiamenti

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